メタロアッセイ 鉄 測定 LS(ニトロソPSAP法)
- メタロアッセイ鉄測定LS(ニトロソPSAP法)は、生物試料(血清・血漿・尿など)中の鉄(Fe2+,Fe3+)をマイクロプレートリーダー(96ウェル)で迅速に定量することができます。
- 本アッセイ原理は免疫抗体法ではなく、キレート定量法であるため、検体の生物種に依存しません。
- 血清、血漿、尿を検体とする場合は前処理不要です。
- キット同梱の標準試料とブランク試料の2点により校正するため、多点校正は不要です。
- 毒劇物を含んでいないため、取扱、廃棄時の安全性に優れています。
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※ 弊社製品マイクロアッセイ UIBC(不飽和鉄結合能)キットとの併用で、TIBC(総鉄結合能)の測定に応用可能です。
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※ 本製品は研究用キットです。診断目的には使用しないでください。
- 名称
- 鉄 測定
(ニトロソPSAP法)
- 製品コード
- FE02M
- 測定対象
- Fe2+
Fe3+
- 対象サンプル
- 血清・血漿・尿などの生物試料
- 測定波長
(極大波長) - 740~760 nm (750 nm)
- 測定範囲
- 10 ~1,000 μg/dL
- 測定回数
(1キット) - 200回
- 価格/円(税別)
- 38,000
測定意義
鉄は重要な構成元素として多くの酵素中に含まれています。血中の鉄はすべてトランスフェリンと結合しており、ミオグロビン、ヘモグロビ ンなど、鉄を必要としているグロビンタンパク質の合成のため、赤芽球や各組織へ輸送されます。酸素を輸送するタンパク質の生成には鉄は不可欠であり、その欠乏は鉄分欠乏性貧血、慢性出血性貧血、感染性の貧血を引き起こします。また、肝炎、肝硬変などでトランスフェリンの増加、高濃度の鉄が観測されます。再生不良性貧血、悪性貧血なども鉄の増加を示します。
測定原理
本法はNitroso-PSAPと鉄とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し鉄濃度を求めます。
トランスフェリン等の輸送タンパク質に結合している鉄を、試薬中の弱酸、変性剤により解離させ、 鉄-Nitroso-PSAP錯体を形成させます。この錯体を波長 750nm で測定することにより鉄濃度を求めることができます。
測定方法(サンプル前処理)
◯本キットでダイレクトに定量可能な試料
e.g.)血清、血漿、尿
キット中の変性剤が鉄をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。
*EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください
*蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。
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◯酸抽出の必要な試料
e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料
サンプルを低pHにすることでタンパクから鉄を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。
- 遊離鉄
- タンパク結合(配位)鉄( Protein-Fe2+、e.g.トランスフェエリン、フェリチン、メタロチオネイン)
- その他、配位結合性鉄
*EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。
*有機鉄やヘム鉄などは酸分解を行って下さい。
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◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料
e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機鉄( -C-Fe-C- 単結合している場合)、環状配位子内包鉄 (Fe-ポルフィリン等)を測定したい試料
酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な鉄キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。
(各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください。)
キット操作方法
- (1) DIW、標準液、アッセイ検体 15 μlを96 well plateにアプライ
- (2) RA 160 μlをwell添加
- (3) 室温で10分間インキュベート
- (4) 発色液 75 μlをwell添加
- (5) 室温で5分間インキュベート
- (6) 主波長750nmの吸光度を測定
- (7) 以下の計算式より鉄濃度を求める
製品仕様
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- 使用目的 :
- 鉄(Fe2+,Fe3+)の測定
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→ 弊社製品マイクロアッセイ UIBC(不飽和鉄結合能)キットとの併用で、TIBC(総鉄結合能)の測定に応用可能です。
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- 測定試料 :
- 血清,血漿,尿,唾液,細胞ライセート,組織抽出液,植物抽出液,毛髪試料抽出液,食品抽出液,飲料水,環境水,鉱水など
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- 測定波長(主波長) :
- 750 nm
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- 感度のある波長域 :
- 740 ~ 760 nm
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他の波長域をご希望の場合 → メタロアッセイ 鉄 測定 LS(フェロジン法)
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- 測定範囲 :
- 10 ~1,000 μg/dL
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- アッセイ法 :
- N-PSAP法
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- 特異性 :
- 生物種を問いません
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- 反応条件 :
- 室温(25ºC〜37ºC)10分間
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- 保存温度 :
- 2-8ºC
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- 有効期限 :
- 製造後12ヶ月
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- 共存物質の影響 :
- 抱合型ビリルビン・非抱合型ビリルビン30 mg/dL
乳び500FTU
ヘモグロビン 0.1 g/dL
ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。
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- 対応している検出機器:
- マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません
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生化学自動分析装置をご使用の場合 → メタロアッセイオート 鉄 N
実施例
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本キットによる管理血清の測定
図1. 鉄濃度が既知である管理血清の測定結果
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本キットによるブタ肝臓中鉄濃度の測定
図2. ICP-OES法と本キットによるブタ肝臓中鉄濃度測定結果
学術情報
本キット使用文献
- Kobayashi M et al.
Iron-heme-Bach1 axis is involved in erythroblast adaptation to iron deficiency.
Haematologica. 2017 Mar. PubMed PMID: 27927768. - Oshima K, Ikeda Y, Horinouchi Y, Watanabe H, Hamano H, Kihira Y, Kishi S, Izawa-Ishizawa Y, Miyamoto L, Hirayama T, Nagasawa H, Ishizawa K, Tsuchiya K, Tamaki T.
Iron suppresses erythropoietin expression via oxidative stress-dependent hypoxia-inducible factor-2 alpha inactivation.
Lab Invest. 2017 Mar 6. doi: 10.1038/labinvest.2017.11. PubMed PMID:28263291. - Yoshida K, Hisabori T.
Distinct Electron Transfer from Ferredoxin-Thioredoxin Reductase to Multiple Thioredoxin Isoforms in Chloroplasts.
Biochem J. 2017 Feb 28. pii: BCJ20161089. doi: 10.1042/BCJ20161089. PubMed PMID: 28246333. - その他の論文リストはこちら
弊社発表文献
- 岩渕拓也:技術情報協会(編) 微量金属分析とその前処理技術,p192-200(2015)
- 岩渕拓也、鈴木裕子:技術情報協会(編) 最先端バイオマーカーを用いた診断薬/診断装置開発と薬事対応(2015)
- 鈴木裕子, 大槻 透, 伊藤奈月, 佐藤文平, 小出和弘, 岩渕拓也, 生体鉄研究に適用できるカラーメトリーアッセイと新規なプローブの活用法, 細胞46(1), 2014.
- その他の文献リストはこちら
本キット参考文献(論文記載用)
- 斎藤幹彦, 堀口大吉, 喜納兼勇, 分析化学, 30, 635-639(1981)