測定意義

亜鉛は200種類を超える金属酵素を構成しており核酸、タンパク質の合成に関わる元素です。

特に細胞の複製には不可欠であり哺乳類においては成長期の急性的な亜鉛欠乏により、皮膚や毛髪の障害、発育遅延などが報告されています。従って、亜鉛の適切な供給は身体の健全な発達に重要です。医学、栄養学的研究において、近年、一層注目されている微量元素です。

測定原理

本法は5-Br-PAPSと亜鉛とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し亜鉛濃度を定量するものです。タンパク質や低分子代謝物に配位している亜鉛を試薬中の変性剤により解離させ、5Br-PAPSと配位結合させることで亜鉛キレート錯体を形成させます。この亜鉛キレート錯体は波長560nm付近に吸収極大を有しており、この吸光度を測定することで亜鉛濃度を求めることができます。

測定方法(サンプル前処理)

• ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

  e.g.)血清、血漿、尿

  キット中の変性剤が亜鉛をタンパクから解離させ、発色させます。特に前処理は必要ありません。

  ＊EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください

  ＊蓄尿をサンプルとする場合は塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2 ~ 3になるよう調整してください。

• ◯酸抽出の必要な試料

  e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

  サンプルを低pHにすることでタンパクから亜鉛を解離させ、上清をアッセイ検体とします。

  ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

  • 遊離亜鉛
  • タンパク結合（配位）亜鉛（ Protein-Zn²⁺ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン）
  • その他、配位結合性亜鉛

  ＊EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

  ＊有機亜鉛やヘム亜鉛などは酸分解を行って下さい。

• ◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

  e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤、有機亜鉛（ -C-Zn-C- 単結合している場合）、環状配位子内包亜鉛 （Zn-ポルフィリン等）を含む試料

  酸抽出では解離しない化学種を測定する場合や強力な亜鉛キレート剤などの妨害物質を含む試料の測定には必要です。

  ＊各分解法で有機物を分解後、pH2 ~ 3に調整し、定容した試料をアッセイ検体としてください。

キット操作方法

1. (1) DIW、標準液、アッセイ検体 12 μlを96 well plateにアプライ
2. (2) RA 230 μlをwell添加
3. (3) 室温で5分間インキュベート
4. (4) 主波長560nm(副波長700 nm)の吸光度を測定
5. (5) 以下の計算式より鉄濃度を求める
   

製品仕様

• • 使用目的 :
  • 亜鉛(Zn²⁺)
• • 測定試料 :
  • 血清，血漿，尿，細胞ライセート，組織抽出液，植物抽出液，毛髪試料抽出液，食品抽出液，飲料水，環境水，鉱水など。
• • 測定範囲 :
  • 4 〜 1,000 μg/dL
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  • → 唾液、低濃度生体試料を測定される場合はメタロアッセイ低濃度亜鉛測定LSキットをご使用下さい。

• • 測定波長(極大波長) :
  • 550 ～ 580 nm (560 nm)
• • 測定回数:
  • 50回 / 100回（ZN01M / ZN02M)
• • アッセイ法 :
  • 5-Br-PAPS
• • 特異性 :
  • 生物種を問いません。
• • 法規制 (毒物及び劇物取締法) :
  • 該当なし
• • 共存物質の影響 :
  • 以下の妨害物質が共存していても測定値に影響を与えません。
    抱合型ビリルビン・非抱合型ビリルビン　150 mg/dL
    ヘモグロビン　0.5 g/dL　
    トリグリセリド　0.5 g/dL
    ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。
    
• • 対応している検出機器:
  • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
    ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません。
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  • 生化学自動分析装置をご使用の場合 → メタロアッセイオート 亜鉛

実施例

• 本キットによる管理血清の測定

  

  図1. 鉄濃度が既知である管理血清の測定結果

• 希釈直線性

  

  図2. 標準試料希釈直線性

その他の実施例はこちら

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